超聲細(xì)胞破碎儀的破碎率受多種因素影響,在優(yōu)化條件下,其破碎率可達(dá)90%以上,但在實際應(yīng)用中一般根據(jù)具體需求選擇合適的參數(shù)和條件,以達(dá)到理想的破碎效果,以下是具體介紹:
1、影響破碎率的因素
超聲功率:功率越大,產(chǎn)生的空化效應(yīng)和機械剪切力越強,越有利于細(xì)胞破碎。但功率過高可能會導(dǎo)致樣品溫度過高,使生物大分子變性失活,還可能對儀器造成損壞。
超聲時間:適當(dāng)延長超聲時間通常能提高破碎率,但過長的時間可能使已破碎的細(xì)胞碎片進(jìn)一步細(xì)化,增加后續(xù)分離純化的難度,也會使樣品溫度過度升高。
樣品濃度:細(xì)胞濃度過高,會使超聲能量分散,影響破碎效果;濃度過低,則會浪費儀器資源和時間。一般來說,需要根據(jù)細(xì)胞類型和儀器性能選擇合適的樣品濃度。
細(xì)胞類型:不同類型的細(xì)胞結(jié)構(gòu)和細(xì)胞壁組成不同,對超聲的耐受程度也不同。例如,細(xì)菌的細(xì)胞壁較厚,需要較高的超聲功率和較長的時間才能破碎;而動物細(xì)胞相對脆弱,更容易被超聲破碎。
2、典型的破碎率范圍
在實驗室中,對于一些常見的細(xì)胞,如大腸桿菌等原核細(xì)胞,在優(yōu)化的超聲條件下,破碎率可以達(dá)到90%以上。對于動物細(xì)胞,如HeLa細(xì)胞等,破碎率也能達(dá)到較高水平,通常在80%-95%左右。對于植物細(xì)胞,由于其有細(xì)胞壁的保護(hù),破碎難度較大,超聲細(xì)胞破碎儀的破碎率一般在60%-80%左右。
實際操作中,應(yīng)通過預(yù)實驗優(yōu)化超聲參數(shù),在保證細(xì)胞破碎率的同時,盡量減少對目標(biāo)產(chǎn)物的影響。此外,還可以結(jié)合其他細(xì)胞破碎方法,如酶解法、化學(xué)法等,以提高破碎效果和破碎率。
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